問答題

λYES(酵母—大腸桿菌穿梭載體)是構建 cDNA 文庫的高效載體,這種載體是λ噬菌體基因組與一個在大腸桿菌和酵母中都能復制的質粒巧妙結合而成,它兼有病毒和質粒載體的優(yōu)點。cDNA 被插入載體的質粒部分,然后它能在體外被包裝入病毒顆粒中,包裝起來的載體感染大腸桿菌的效率比質粒本身要高得多。一旦進入了大腸桿菌,λYES中的質粒序列能夠被誘導重組出λ基因組,并進行獨立復制,這就可以從質粒中分離出來,以便進行進一步的遺傳操作。       為了最大限度地提高克隆效率,載體用只有一個切點的限制性內切核酸酶 XhoI(5’-C十 TCGAG)進行切割,然后在 dTTP 存在的情況下,同 DNA 聚合酶一起進行溫育。將一種具有平末端的雙鏈 cDNA 同一段含由兩段寡聚核苷酸組成的雙鏈寡聚核苷酸接頭連接起來,這兩段寡聚核苷酸的序列是:5’—CGAGATTTACC 和5’—GGTAAATC,它們的 5’端都是磷酸。然后將載體和 cDNA混合并連接在一起。采用這種方法用 2μg的7載體和 0.1μg 的 cDNA,構建了一個有 4×10 個克隆的 cDNA 文庫。

在此過程中,載體分子轉變成重組體的頻率是多少(每對核苷酸的平均分子量 660Da)?

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2.問答題

X染色體的失活是一種獨特的發(fā)育調控機制,它關閉了整個染色體上的所有基因的表達。在人類 X 染色體中,失活作用涉及到 1.5×108 以上的堿基對和幾千個基因。在女性中,兩條X染色體中的任何一條失活所造成的X連鎖基因的表達與正常男性單個X染色體上基因表達的結果是相同的。雖然失活的機理仍不了解,一般認為失活作用是在染色體的特定區(qū)域即 X 失活中心開始的,然后擴散到染色體的其他部分。雖然失活染色體上的大多數基因被關閉了,但少數仍有活性,因此,可以推測 X 的失活作用與 X 連鎖基因的表達模式有關。為了驗證這種推測,分離了大量的人的 X 染色體基因的 cDNA 并用 Northern 印跡法檢查它們的表達。比較了這些基因在 X 染色體正常的男性和女性細胞中的表達、在 X 染色體異常的男性和女性個體中的表達、以及在嚙齒動物:人細胞雜交株中的表達,這種雜交株保留了一個失活的人的 X染色體(Xi)或是一個有活性的人 X染色體(Xa)。在四種 cDNA 中,發(fā)現了三種表達模式,A、B、C 三種 cDNA示于圖 4。

指出每一種表達模式中表達的基因是來自于活性染色體、非活性染色體,還是二者都有。哪一種是最普遍的,哪一種是最特殊的?
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