問(wèn)答題λYES（酵母—大腸桿菌穿梭載體）是構(gòu)建 cDNA 文庫(kù)的高效載體，這種載體是λ噬菌體基因組與一個(gè)在大腸桿菌和酵母中都能復(fù)制的質(zhì)粒巧妙結(jié)合而成，它兼有病毒和質(zhì)粒載體的優(yōu)點(diǎn)。cDNA 被插入載體的質(zhì)粒部分，然后它能在體外被包裝入病毒顆粒中，包裝起來(lái)的載體感染大腸桿菌的效率比質(zhì)粒本身要高得多。一旦進(jìn)入了大腸桿菌，λYES中的質(zhì)粒序列能夠被誘導(dǎo)重組出λ基因組，并進(jìn)行獨(dú)立復(fù)制，這就可以從質(zhì)粒中分離出來(lái)，以便進(jìn)行進(jìn)一步的遺傳操作。
為了最大限度地提高克隆效率，載體用只有一個(gè)切點(diǎn)的限制性內(nèi)切核酸酶 XhoI（5’-C十 TCGAG）進(jìn)行切割，然后在 dTTP 存在的情況下，同 DNA 聚合酶一起進(jìn)行溫育。將一種具有平末端的雙鏈 cDNA 同一段含由兩段寡聚核苷酸組成的雙鏈寡聚核苷酸接頭連接起來(lái)，這兩段寡聚核苷酸的序列是：5’—CGAGATTTACC 和5’—GGTAAATC，它們的 5’端都是磷酸。然后將載體和 cDNA混合并連接在一起。采用這種方法用 2μg的7載體和 0.1μg 的 cDNA，構(gòu)建了一個(gè)有 4×10 個(gè)克隆的 cDNA 文庫(kù)。說(shuō)明怎樣處理載體和 cDNA 分子，才能把它們連接到一起。處理過(guò)的載體本身能自連嗎？cDNA呢？
